感谢 　　解剖小牛后适量采集小牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及淋巴结等，混合研磨后反复冻融3次，再用匀浆器磨20min后收集匀浆，10r/min离心10min，用上清液提取DNA。用支原体PCR检测试剂盒［购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司（MYCOP）］进行PCR检测。反应体系：PCR反应液16μL，TapDNA聚合酶2μL，DNA模板2μL，总体积20μL。反应程序：94℃预变性3min；94℃变性30ｓ，50℃退火30ｓ，72℃延伸45ｓ，共35个循环；72℃延伸10min。反应结束后取5μLPCR产物于1%1×TAE琼脂糖凝胶中电泳检测（90V，35min），凝胶成像系统拍照记录。结果未检出支原体特异性阳性条带。

3.3　牛病毒性腹泻－黏膜病病毒和口蹄疫病毒的RT-PCR检测

解剖小牛后适量采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及淋巴结等，混合研磨后反复冻融3次，匀浆器磨20min后收集匀浆，10r/min离心10min，取上清液，用TaKaRaMinBESTViraLDNA/RNAEｘTracTionKiTVer．5.0试剂盒提取总RNA，分别进行牛病毒性腹泻－黏膜病病毒和口蹄疫病毒的RT-PCR扩增。反应结束后，取5μLPCR产物于1%1×TAE琼脂糖凝胶中电泳检测（90V，35min），用凝胶成像系统拍照记录。结果病料中检测出牛病毒性腹泻-黏膜病特异性阳性条带（bp），未检出牛口蹄疫特异性核酸阳性条带。

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诊断结果

根据临床症状、病理剖检、细菌培养及PCR/RT-PCR检测，确诊该牛场送检小牛为牛病毒性腹泻-黏膜病病毒感染。

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防治

　　首先对发病牛进行隔离饲养；对检测有牛病毒性腹泻-黏膜病病毒感染牛进行淘汰；对病死牛进行深埋或焚烧处理；对牛场进行严格的封锁、隔离、消毒，严格控制人员和货物进出；及时清除粪便和污物，保持牛舍清洁、干燥；对污染的圈舍和四周环境用2%烧碱（NaOH）进行严格消毒。针对该牛场出现牛病毒性腹泻-黏膜病病毒感染严重并出现小牛发病严重的情况，建议该牛场对未发病牛采取紧急接种牛病毒性腹泻-黏膜病疫苗，或对全场牛接种猪瘟兔化弱毒疫苗（兔源脾淋苗），10头份/头，间隔30d再免疫1次。妊娠母牛在产前注射猪瘟兔化弱毒疫苗15头份/头，在产前2～4个月注射。注射疫苗后有极个别奶牛出现肌肉震颤、口角流涎等症状，一般10～30min后症状消失。

来 　　源

《黑龙江畜牧兽医》年第04期第-,-页《贵州省某牛场牛病毒性腹泻-黏膜病的诊治》

???版权归原作者所有，向原创致敬???

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